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ArcA

Member of the two-component regulatory system ArcB/ArcA. Represses a wide variety of aerobic enzymes under anaerobic conditions. Controls the resistance of E.coli to dyes; required for expression of the alkaline phosphatase and sex factor F genes; It also may be involved in the osmoregulation of envelope proteins. When activated by ArcB, it negatively regulates the expression of genes of aerobic function. Activates the transcription of the plfB operon by binding to its promoter. Mw; 27,000

泳動結果

バクテリアの情報伝達経路には,ヒスチジンとアスパラギン酸による
リン酸基転位反応によって行われるものがあり,
二成分伝達系と言われます。

外界の環境変化を捉えるセンサーキナーゼ(ヒスチジンキナーゼHK)と
レスポンスレギュレータのペアから成ります。

センサーキナーゼのヒスチジンが自己リン酸化によってリン酸化し,
そのリン酸基がレスポンスレギュレータのアスパラギン酸に転移されます。
レスポンスレギュレータ〜は転写因子として支配下の遺伝子発現に関わります。

本実験は,E.coli の 二成分伝達系ArcB/ArcA
のレスポンスレギュレータArcA の in vitro kinase assayです。
ArcA はHis-tagタンパク質として発現,精製したものです

アセチルリン酸存在下で,アスパラギン酸54がリン酸化されます。

 

関連画像

E.coli ArcB/ArcA, in vitro kinase assay

Reference

Kinoshita-Kikuta, E., Akayama, K., Kinoshita, E., Koike, T. A dot-blot-staining method for detecting phosphoproteins with a Phos-tag Aqua fluorescent dye J.Electrophoresis (2021)

DOI

ゲルの条件

Zn2+–Phos-tag: 20µM

Polyacrylamide: 10%(w/v)

検出方法 CBB stain

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